EGFR — новий спільник PEDV: допомагає вірусу проникати в клітину
Нокаут EGFR у клітинах Vero частково блокує внутрішню інтерналізацію PEDV, не впливаючи на прикріплення. S-білок вірусу зв'язується з EGFR, а комплекс далі проходить через ранні та пізні ендосоми до лізосом. Це розширює розуміння вхідних шляхів коронавірусів і дає нову мішень для противірусних стратегій.
PEDV викликає гостру діарею, блювання, зневоднення і високу смертність у поросят-сисунів. Досі відомо, що EGFR підсилює інфекцію через пригнічення JAK-STAT та інтерферонової відповіді. Але чи бере він участь у самому проникненні вірусу — не було з'ясовано.
Дослідники з Хенанського аграрного університету (Китай) зробили EGFR-нокаутну лінію Vero за допомогою CRISPR/Cas9 (дві sgRNA, електропорація, відбір пуроміцином, лімітуюче розведення до 0,5 клітини на лунку). Нокаут підтвердили ПЛР із праймерами на випадання ділянки, секвенуванням і вестерн-блотом.
Ключові результати:
- Ко-імунопреципітація показала, що S-білок PEDV зв'язується з EGFR. Молекулярний докінг (HDOCK, структура S — PDB 6U7K, EGFR — модель AlphaFold3) передбачив відповідний сайт взаємодії.
- Тести на прикріплення і внутрішню інтерналізацію: у EGFR-KO клітинах прикріплення вірусу не змінилося, а інтерналізація частково порушилася. Тобто EGFR працює не на етапі адсорбції, а на етапі входу.
- Конфокальна колокалізація: PEDV збігається з EGFR у ранніх ендосомах (EEA1), пізніх ендосомах (RAB7) і лізосомах (LAMP1). У EGFR-KO клітинах колокалізація з пізніми ендосомами порушена — вірус застрягає на шляху дозрівання ендосом.
Висновок для практики: EGFR — хазяйський ко-фактор, який підтримує інфекцію PEDV двома способами: тягне вірус всередину клітини через зв'язування з S-білком і забезпечує подальший транспорт через ендо-/лізосомальний шлях. Це не рецептор прикріплення, а «провідник» входу. Для ветеринарії це означає потенційну мішень: інгібування EGFR або його взаємодії з S-білком може уповільнити ранню фазу інфекції. Водночас треба пам'ятати, що EGFR задіяний у багатьох фізіологічних процесах, тож терапевтичне втручання потребує обережності.
Обмеження: робота виконана на лінії Vero (ниркові клітини мавпи), а не на кишкових епітеліоцитах свиней; in vivo даних немає. Часткове порушення інтерналізації вказує, що існують й інші шляхи входу.