Проточна цитометрія у морських свинок: робоча панель антитіл і що вона показала при лімфомі
Чеські дослідники зібрали практичну панель антитіл для імунофенотипування лейкоцитів у морських свинок і прогнали її на здорових тваринах та на випадках підозри на лімфопроліферативну хворобу. У здорових дорослих свинок лімфоцити домінують (медіана 62,5%), серед них T-клітини — 78,9%, B-клітини — лише 6,3%. Усі п'ять гістологічно підтверджених B-клітинних новоутворень мали виражений B-клітинний лімфоцитоз і низьке співвідношення T/B.
Навіщо це робили
Проточна цитометрія давно працює в гуманній і ветеринарній медицині, але у морських свинок вона досі майже не використовується — немає видоспецифічних антитіл і готових панелей. При цьому морські свинки і в дослідженнях, і в клініці екзотичних тварин зустрічаються дедалі частіше. Новоутворення у них часте явище: поширеність зростає з 1,4% у тварин молодше 6 місяців до 53,6% у тварин старше 6 років, а лімфопроліферативні хвороби за двома ретроспективними дослідженнями біопсій становлять 7,0% і 10,46%.
Хто був у дослідженні
Три групи. Здорові клієнтські дорослі свинки 2–3 років (n=13) — без скарг, без відхилень у клінічному огляді, гематології, біохімії, копрології та аналізі сечі. Група з підозрою на лімфому (n=9) — за наявності генералізованої периферичної лімфаденопатії, пальпованої маси в ділянці шиї та/або лейкоцитозу переважно за рахунок лімфоцитів. Плюс експериментальна когорта (контроль без втручань), яку брали кров двічі — у 2 і 9 місяців — лише для порівняння співвідношення T/B за віком. Кров брали з краніальної порожнистої вени, еритроцити лізували амоній хлоридом, тканину лімфовузлів дезагрегували через сито 100 мкм.
Панелі
Три багатоколірні панелі плюс контролі FMO. Панель 1: CD45 / MIL-4 / CD14 / panT / CD1b3 — ідентифікація лейкоцитів за CD45, розділення гранулоцитів, моноцитів і лімфоцитів за FSC/SSC та MIL-4. Панель 2: panT / CD1b3 / CD14 / CD4 / CD8 — T- і B-лімфоцити, субпопуляції CD4/CD8. Панель 3: panT / CD1b3 / CD14 + внутрішньоклітинний CD79α — підтвердження B-клітинної природи.
Результати у здорових
І рутинна гематологія, і цитометрія показали лімфоцит-домінантний профіль периферичної крові. За цитометрією лімфоцити — медіана 62,5% життєздатних лейкоцитів, нейтрофіли — 8,0%, еозинофіли — 8,5%, моноцити — 3,0%. У лімфоцитарному гейті T-клітини становили 78,9%, B-клітини — 6,3%. Найбільша субпопуляція T-клітин — CD8+CD4−. Співвідношення T/B достовірно не відрізнялося між віком 2 місяці, 9 місяців і 2–3 роки.
Що дали клінічні випадки
Усі п'ять гістологічно підтверджених лімфоїдних новоутворень з B-клітинним фенотипом супроводжувалися вираженим B-клітинним лімфоцитозом у периферичній крові та низьким співвідношенням T/B. Такий виражений циркулюючий лімфоцитоз змушував диференціювати лімфому з ураженням периферичної крові від первинної B-клітинної лейкемії. Там, де паралельно досліджували тканину, імунофенотип тканини збігався з B-клітинним лімфоїдним новоутворенням.
Що з цього для практики
Панель реально впровадити в роботі — вона підтверджує T-клітинне переважання серед лімфоцитів периферичної крові у здорових дорослих морських свинок і дає швидку додаткову імунофенотипову інформацію при підозрі на лімфопроліферативну хворобу. Гістопатологія з імуногістохімією залишається стандартом, але цитометрія дозволяє класифікувати лімфоїдні малігнації раніше й точніше, а також моніторити інші гематологічні та імуноопосередковані стани.