Мультиепітопна вакцина проти G2c PEDV: усі поросята вижили після зараження
Нова мультиепітопна вакцина на основі S, M і N білків PEDV генотипу G2c з ад'ювантом PBD-1 викликала IgG, IgA та нейтралізуючі антитіла у поросят. Після зараження вірулентним штамом G2c вижили 5/5 щеплених проти 3/5 у групі комерційної інактивованої вакцини і 0/5 у контролі.
PEDV лишається клінічно значущим ентеровірусом: діарея, блювання, зневоднення, висока смертність у поросят-сисунів. Комерційні вакцини дають нестабільний захист проти генетично різнорідних польових штамів, особливо G2c. Тому автори зібрали мультиепітопну конструкцію з білків S, M і N.
Дизайн вакцини. Відібрали 8 лінійних B-клітинних епітопів, 1 CTL-епітоп і 5 HTL-епітопів; прогнозовано ще 6 конформаційних B-клітинних епітопів. Як ад'ювант до N-кінця приєднали свинячий β-дефензин-1 (PBD-1) через лінкер EAAAK. Лінійні B-епітопи розділили KK-лінкерами, CTL і HTL зони — спейсером HEYGAEALERAG, HTL-епітопи — GPGPG-лінкерами, перед C-кінцевим His-тегом поставили RVRR. Така схема має розділяти функціональні ділянки й зменшувати кількість епітопів на стиках.
Прогноз і структура. Конструкція показала добру антигенність, розчинність і структурну стабільність. Третинну структуру змоделювали в Robetta, уточнили в GalaxyRefine, якість перевірили через Ramachandran-графіки, ProSA-web і SAVES. Докінг робили з людським TLR3 (PDB 2A0Z), бо експериментальної структури свинячого TLR3 екто-домену немає; додатково змоделювали свинячий TLR3 (UniProt F1RZN4) у SWISS-MODEL. Імунну відповідь симулювали в C-ImmSim (дві імунізації з інтервалом 7 днів).
Експресія. Послідовність синтезували й вставили в pET-30a(+), трансформували в E. coli Rosetta2(DE3), білок очистили Ni2+-афінною хроматографією. Експресію й розчинність перевірили SDS-PAGE 12%, ідентичність — вестерн-блотом.
Схема на тваринах. Двадцять поросят віком 5 тижнів без історії PEDV і без вакцинації розділили на 4 групи по 5. Перша імунізація у 5 тижнів, зараження — у 10 тижнів (тобто після двох доз). Утримання в ізольованих приміщеннях з контролем температури, однакові умови годівлі. Дозвіл етичного комітету Chengdu University of Traditional Chinese Medicine № 2024–049.
Результати. Пептидна вакцина SMN викликала PEDV-специфічні IgG, IgA, цитокінову відповідь і нейтралізуючі антитіла. Після зараження вірулентним штамом G2c:
- група пептидної вакцини — вижили 5/5 у кожній групі;
- комерційна інактивована вакцина — 3/5;
- PBS-контроль — 0/5.
Що це означає для практики. Кандидат MEV індукує імунну відповідь і покращує виживаність поросят при зараженні G2c, тобто має сенс для подальшої розробки як вакцина проти PEDV. Обмеження: мала вибірка (n=5 на групу), одна схема імунізації, один штам зараження. Дані про тривалість імунітету, передачу материнських антитіл і масштабованість виробництва в статті не наведені.