Сироваткові білки перед суперовуляцією можуть передбачити вихід ембріонів у корів
Протеомний аналіз сироватки 33 корів-донорів виявив білки, які ще до початку стимуляції FSH дозволяють відрізнити тварин з високим і низьким виходом ембріонів. TCN2 і DNMT1 показали AUC 0,96 і 1,00 — це реальний шанс на неінвазивний відбір донорів.
Суперовуляція — ключовий інструмент прискорення генетичного прогресу в скотарстві, але відповідь яєчників на протокол у різних донорів дуже різна. Через це вихід ембріонів непередбачуваний, а гормональні препарати й витрати часто використовуються неефективно. Дослідження шукало сироваткові білки, які могли б передбачити результат ще до початку стимуляції.
Дизайн. 33 статевозрілі здорові корови породи Хуасі, 2–4 роки, маса 580 ± 20 кг, без репродуктивних розладів. Протокол: CIDR (1,38 г прогестерону) на D0; з D9 по D12 — 500 мкг FSH (Stimufol) внутрішньом'язово у вісім спадних доз (кожна на 10 % менша за попередню); 300 мкг PGF2α разом із п'ятою ін'єкцією FSH; CIDR видаляли на останній ін'єкції FSH. Тічку визначали на D13, осіменяли двічі з інтервалом 12 год. На D20 — нехірургічний флашинг матки під каудальною епідуральною анестезією (5 мл лідокаїну).
Точки забору крові. BS — до введення FSH (антральні фолікули ще «сплять», не рекрутовані); E — у момент виявлення тічки (передовуляторна стадія, фолікули дозріли). Сироватку отримували центрифугуванням при 8 000 × g, 10 хв, зберігали в рідкому азоті.
Групи. За загальною кількістю ембріонів: HEY — ≥13 життєздатних ембріонів (n = 5), LEY — ≤5 (n = 5). Усього зібрано 352 ембріони.
Протеоміка. LC–MS/MS на TimsTOF HT із nanoElute2, DIA-режим, колонка C18. Ідентифіковано 1 620 білків (11 726 анотованих записів). Диференційно експресованих білків: 154 на точці BS і 102 на точці E (|log2FC| ≥ 0,263; P < 0,05; FDR < 0,01). 13 білків спільні для обох точок, серед них — вітамін-D-зв'язувальний білок (GC), який стабільно підвищений. Збагачені шляхи переважно метаболічні.
Ключові маркери. На BS з групою HEY асоційовані підвищені TCN2 (AUC = 0,96) і DNMT1 (AUC = 1,00). На E — AGRN (AUC = 1,00), RCN3 (AUC = 0,80) і WNT7B (AUC = 0,84). Це означає, що вже до першої ін'єкції FSH можна з високою точністю відділити донорів, які дадуть багато ембріонів, від тих, хто дасть мало.
Що це дає на практиці. З'являється основа для неінвазивного тесту — один забір крові перед стартом протоколу замість того, щоб витрачати FSH, PGF2α, час і працю на тварину з передбачувано низькою відповіддю. Поки що це пілотні дані на малій вибірці (по 5 голів у групі), тому потрібні валідація на більших когортах і перевірка на інших породах. Але напрямок робочий: сироватковий протеом відображає функцію яєчників, і його можна читати як прогноз.