Дві хвороби — один тест: нова смужка для швидкої діагностики бруцельозу та туберкульозу ВРХ
Китайські вчені розробили тест-смужку на флуоресцентних мікросферах, яка за 20 хвилин одночасно виявляє антитіла до бруцел і M. bovis у сироватці ВРХ. Чутливість вища, ніж у колоїдного золота, збіг із ELISA — до 95,5%. Це рішення для польової діагностики, де немає лабораторій.
Бруцельоз і туберкульоз великої рогатої худоби — дві зоонозні інфекції, які завдають серйозних збитків тваринництву. Обидві входять до переліку нотіфікованих хвороб WOAH. Проблема в тому, що наявні методи діагностики або повільні (бактеріологія), або потребують обладнання (ELISA, ПЛР), або мають низьку специфічність (РБП, РА). Для польових умов потрібен швидкий і чутливий тест, який би закрив обидві хвороби одразу.
Дослідники з Шанхайського ветеринарного інституту розробили дуальну тест-смужку на основі флуоресцентних мікросфер. Принцип роботи: мікросфери кон'юговані з рекомбінантним білком G стрептокока (rSPG), який зв'язує антитіла IgG. На тестовій лінії 1 (TL1) нанесений ліпополісахарид бруцел, на тестовій лінії 2 (TL2) — рекомбінантний білок MPB70 M. bovis. Контрольна лінія — rSPG. Якщо в зразку є антитіла до збудників, вони зв'язуються з кон'югатом і осідають на відповідній лінії, даючи флуоресцентний сигнал.
Оптимальні параметри підібрали емпірично: концентрація антигену для TL1 — 0,5 мг/мл, для TL2 — 1,0 мг/мл, кон'югація мікросфер — 0,25 мг/мл. Час аналізу — 20 хвилин. Порогові значення співвідношення інтенсивності флуоресценції тестової лінії до контрольної (T/C) становили 0,041 для бруцел і 0,028 для M. bovis.
Ключові результати:
- Специфічність висока, перехресних реакцій не виявлено.
- Чутливість вища, ніж у комерційних тестів на колоїдному золоті.
- Відтворюваність у межах серії та між серіями — коефіцієнт варіації менше 10%.
- На 67 клінічних зразках збіг із комерційними ELISA-наборами: 92,54% для бруцельозу, 95,52% для туберкульозу.
Для практики це означає: тест-смужку можна використовувати на фермі, на ринку, при переміщенні тварин — без лабораторії та спеціальної підготовки персоналу. Один зразок сироватки, одна смужка, 20 хвилин — і маєш результат одразу за двома інфекціями. Це суттєво спрощує скринінг і пришвидшує ухвалення рішень щодо ізоляції чи вибракування.
Обмеження: тест працює з сироваткою, тобто потрібен забір крові. Також не розрізняє вакцинні антитіла від інфекційних — це спільна проблема всіх серологічних методів. Але як інструмент первинного скринінгу в польових умовах він виглядає дуже перспективно.